关于人凝血酶原复合物等4种制品规程转正的通知
国家食品药品监督管理局
关于人凝血酶原复合物等4种制品规程转正的通知
国食药监注[2004]122号
各省、自治区、直辖市食品药品监督管理局（药品监督管理局）：
原国家药品监督管理局曾于2000年8月4日印发《关于颁布执行〈中国生物制品规程〉2000年版的通知》（国药管注〔2000〕337号）规定，收载于《中国生物制品规程》2000年版暂行规程的品种，须在三年内（至2003年9月30日）完成相应的质量控制标准、检定方法及临床疗效的评价等工作。截止2003年9月30日，原收载于暂行规程的人凝血酶原复合物、组织胺人免疫球蛋白、注射用抗乙型肝炎转移因子和金葡素注射液等4个品种已完成了相关的改进工作，经中国生物制品标准化委员会相关专业委员会讨论通过，现予颁布（见附件），并就有关规程转正通知如下：
一、上述4个品种转正规程自2004年8月1日起正式执行。自执行之日起，原暂行规程予以废止。
二、生产上述暂行规程转正品种的药品生产企业应按照转正规程的要求，生产3批样品送中国药品生物制品检定所进行质量复核，并按照《药品注册管理办法（试行）》的相关规定拟定注册标准，以补充申请方式报我局审批。
三、请各省、自治区、直辖市食品药品监督管理部门负责通知辖区内相关药品生产企业。
四、对暂行规程中尚未获得批准转正的其他品种的处理意见，我局将另行通知。
附件：1．人凝血酶原复合物制造及检定规程
2．组织胺人免疫球蛋白制造及检定规程
3．注射用抗乙型肝炎转移因子制造及检定规程
4．金葡素注射液制造及检定规程
国家食品药品监督管理局
二○○四年四月十九日
附件1：
人凝血酶原复合物制造及检定规程
RequirementsforProthrombinComplex
本品系由健康人的血浆，经低温乙醇蛋白分离法或经国家药品监督管理部门批准的其他方法提制，并经病毒灭活处理而得的冻干制剂，内含凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ及适宜稳定剂。不含防腐剂和抗生素。
1 基本要求
1.1.1 设施与生产质量管理
按中国《药品生产质量管理规范》要求实施。厂房设施必须专用，不得与其他异种蛋白制剂混用。
1.1.2 原料及辅料
生产中所用的稀释剂、稳定剂、防腐剂、灭活剂、佐剂，及其他化工原料，其质量应符合现行《中国药典》或《中国生物制品主要原辅材料质控标准》的要求。
辅料品种与用量应当无害，不影响制品的安全性和有效性，并应对规定的检定方法无干扰。
化工及食品原料作为原料时，必须制定符合药用要求的标准，并需经国家药品监督管理部门批准。
1.1.3 生产用水
生产用水源水应符合饮用水标准，纯化水、注射用水及灭菌注射用水应符合现行《中国药典》标准。
1.1.4 生产用器具
直接用于生产的金属或玻璃等器具，必须专用，并经过严格清洗及去热原质处理或灭菌处理。
2 制造
2.1 原料血浆
2.1.1 血浆的来源、采集及质量应符合本版规程通则《原料血浆采集规程》要求。血浆应无凝块，无纤维蛋白析出，非脂血，无溶血。
2.1.2 去除冷沉淀、凝血因子Ⅷ的血浆及组分Ⅲ沉淀均可用于生产。
2.1.3 组分Ⅲ沉淀存放于-30℃以下，保存时间不得超过6个月。
2.2 原液制备
2.2.1 可采用直接从血浆中用凝胶吸附法或低温乙醇和聚乙二醇分离蛋白并经凝胶吸附法制备，亦可用经国家药品监督管理部门批准的其他方法制备。生产过程中不能加任何防腐剂或抗生素。
2.2.2 蛋白质透析和浓缩，应采用超滤法。澄清及除菌过滤，应使用无石棉的介质。
2.2.3 原液检定
按3.1项进行。
2.3 半成品制备
2.3.1 配制
按出品规格配制，制品内可加适宜的稳定剂。若加肝素，则每１.0IU因子Ⅸ肝素加量不超过0.5IU。
2.3.2 半成品检定
按3.2项进行。
2.4 成品制备
2.4.1 分批
应符合本版规程通则《生物制品分批规程》的有关规定。
2.4.2 分装及冻干
按本版规程通则《生物制品分装规程》进行。除菌过滤分装的制品应立即冻结。冻干过程制品温度不得超过35℃，真空封口。
2.4.3 规格
每瓶人凝血因子Ⅸ的效价可分为100、200、300、400、1000IU5种，同时制品还含有人凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅹ。
2.4.4 包装
应符合本版规程通则《生物制品包装规程》的有关规定。
2.5 病毒去除和灭活
生产过程中应有特定的去除和灭活脂包膜和非脂包膜病毒处理。如果应用灭活剂（如有机溶剂、去污剂）灭活病毒，则应规定人用安全的灭活剂残留量最高限值。
3 检定
3.1 原液检定
3.1.1 pH值
按3.3.3.2项进行。
3.1.2 活性测定
3.1.2.1 人凝血因子Ⅸ活性及比活性
每1ml人凝血因子Ⅸ效价应不低于10IU（附录1），比活性应不低于0.3IU/mg蛋白。
3.2 半成品检定
3.2.1 热原质试验
按本版规程通则《生物制品热原质试验规程》进行。注射剂量按家兔体重每1kg注射30IU人凝血因子Ⅸ，应符合规定。
3.2.2 无菌试验
按本版规程通则《生物制品无菌试验规程》A项进行，符合规定。
3.3 成品检定
每批制品应抽样作全面质量检定，不同机柜冻干的制品分别抽样做无菌试验和水分测定。以下检定项目除真空度、溶解时间、水分外，其余项目按制品标示量加入灭菌注射用水溶解后进行检定。
3.3.1 鉴别试验
按《中国生物制品规程》2002年增补本《血液制品鉴别试验》A法进行。仅与抗人的血清产生沉淀线，与抗马、抗牛、抗猪、抗羊血清不产生沉淀线。
3.3.2 物理检查
3.3.2.1 外观
应为白色或灰绿色疏松体，复溶后应为无色、淡黄色、淡蓝色或黄绿色澄明溶液，不应有异物或沉淀。
3.3.2.2 真空度
以高频火花真空测定器检测，瓶内应出现蓝紫色辉光。
3.3.2.3 溶解时间
向已平衡至20～25℃的制品，加入标示量的20～25℃灭菌注射用水，轻轻摇动，应于15分钟内完全溶解。
3.3.3 化学检定
按本版规程附录《生物制品化学及其他检定方法》进行。
3.3.3.1 水分
应不高于3.0%。
3.3.3.2 pH值
在20℃±2℃测定，pH值为6.5～7.5。
3.3.3.3 PEG含量
应不高于0.5g/L。
3.3.3.4 钠离子含量
应不高于160mmol/L。
3.3.3.5 枸橼酸离子含量
应不高于25mmol/L。
3.3.4 效价测定
3.3.4.1 人凝血因子Ⅸ
3.3.4.1.1 效价
按附录1法测定，凝血因子Ⅸ活性应不低于10IU。按3.3.2.3项加入的溶剂量，计算每瓶人凝血因子Ⅸ效价，应为标示量的80%～140%。
3.3.4.1.2 比活性
应不低于0.3IU/mg蛋白质。
3.3.4.2 人凝血因子Ⅱ效价
按3.3.2.3项加入的溶剂量及每1ml人凝血因子Ⅱ活性（附录2），计算每瓶人凝血因子Ⅱ效价，应不低于标示量的80%。
3.3.4.3 人凝血因子Ⅶ效价
按3.3.2.3项加入的溶剂量及每1ml人凝血因子Ⅶ活性（附录3），计算每瓶人凝血因子Ⅶ效价，应不低于标示量的80%。
3.3.4.4 人凝血因子Ⅹ效价
按3.3.2.3项加入的溶剂量及每1ml人凝血因子Ⅹ活性（附录4），计算每瓶人凝血因子Ⅹ效价，应不低于标示量的80%。
3.3.5 人凝血酶活性
按附录5方法测定。不得有凝块或纤维蛋白析出。
3.3.6 肝素含量
按附录6法测定，每1IU人凝血因子Ⅸ肝素含量应不高于0.5IU。
3.3.7 活化的凝血因子
按附录7方法测定，凝固时间应不低于150秒。
3.3.8无菌检查
按本版规程通则《生物制品无菌试验规程》A项进行，符合规定。
3.3.9 异常毒性检查
按本版规程通则《生物制品异常毒性试验规程》进行。豚鼠每只注射供试品5ml（每1ml含10IU人凝血因子Ⅸ），小鼠每只注射供试品0.5ml（每1ml含10IU人凝血因子Ⅸ），应符合规定。
3.3.10 热原质检查
按本版规程通则《生物制品热原质试验规程》进行。注射剂量按家兔体重每1kg注射30IU人凝血因子Ⅸ，应符合规定。
3.3.11 HBsAg
按试剂盒说明书测定，应为阴性。
3.3.12 根据病毒灭活方法，应增加相应的检定项目。若采用磷酸三丁酯和吐温-80法灭活病毒，则应检测磷酸三丁酯和吐温-80残留量。
3.3.12.1 磷酸三丁酯残留量
应不高于10μg/ml。
3.3.12.2 吐温-80残留量
应不高于100μg/ml。
4 保存、运输及有效期
应在2～8℃避光保存和运输。有效期自分装之日起，按国家药品监督管理部门批准的执行。
5 使用说明
根据国家药品监督管理部门批准的内容及本版规程通则《生物制品包装规程》编写。
6 附录
附录1 人凝血因子Ⅸ效价测定法（一期法）
附录2 人凝血因子Ⅱ效价测定法（一期法）
附录3 人凝血因子Ⅶ活性测定法（一期法）
附录4 人凝血因子X效价测定法（一期法）
附录5 人凝血酶活性测定法
附录6 肝素含量测定法（凝固法）
附录7 活化的凝血因子活性测定法
附录1 人凝血因子Ⅸ效价测定法（一期法）
本法用人凝血因子Ⅸ缺乏血浆作为基质血浆，采用一期法测定供试品人凝血因子Ⅸ效价。
1 试剂
1.1 3.8%柠檬酸三钠溶液
称取无水柠檬酸三钠9.5g，加水溶解并稀释至250ml。
1.2 咪唑缓冲液
称咪唑0.68g和氯化钠1.17g溶于100ml水中，加入0.1mol/L盐酸42.2ml，然后补加水至200ml，pH为7.3。
1.3 稀释液
取1容积的3.8%柠檬酸三钠加入5容积咪唑缓冲液混合，加人血白蛋白至终浓度为1%。
1.4 激活的部分凝血活酶（APTT）试剂
1.5 人凝血因子Ⅸ缺乏血浆
为人凝血因子Ⅸ含量低于1%的乙型血友病病人血浆或人工基质血浆。
1.6 0.05mol/L氯化钙溶液
称氯化钙（CaCl2.2H2O）147g，加水溶解并稀释至1000ml，配制成1mol/L氯化钙贮存液，用前用水稀释20倍，配成0.05mol/L氯化钙溶液。
2 人凝血因子Ⅸ标准溶液的配制
用人凝血因子Ⅷ缺乏血浆将人凝血因子Ⅸ标准品稀释成1IU/ml，再用稀释液分别进行10倍、20倍、40倍和80倍稀释，置冰浴待用。
3 供试品溶液的配制
若供试品中含有肝素，先用硫酸鱼精蛋白中和供试品中的肝素。测定时先用人凝血因子Ⅸ缺乏血浆稀释成约1IU/ml，再用稀释液进行10倍和20倍或40倍稀释，置冰浴待用。
4 测定法
取APTT试剂0.1ml，置37℃保温一定时间（一般4分钟），加人凝血因子Ⅸ缺乏血浆0.1ml、供试品溶液0.1ml，混匀，置37℃保温一定时间（一般5分钟），加已预热至37℃0.05mol/L氯化钙溶液0.1ml，记录凝固时间。
用不同稀释度的人凝血因子Ⅸ标准溶液0.1ml替代供试品溶液，同法操作。
5 结果计算
将标准溶液中人凝血因子Ⅸ活性（IU/ml）对其相应的凝固时间（秒）进行双对数直线回归处理，求出直线回归方程。将供试品溶液的凝固时间（秒）对数值代入方程，求得的值的反对数，再乘以稀释倍数，即为每1ml供试品溶液中人凝血因子Ⅸ效价（IU/ml），取供试品各稀释度的人凝血因子Ⅸ效价均值即为供试品中人凝血因子Ⅸ效价（IU/ml）。
【附注】
（1）直线回归相关系数应不低于0.98。
（2）测定时，要求每个稀释度平行测定2管，两管之差不得超过均值10%，否则重测。
（3）直接与标准品、供试品和血浆接触的器皿应为塑料或硅化制品。
（4）标准品和供试品稀释后，应置冰浴待用。
（5）采用全自动凝血仪时，则按仪器使用说明书进行。
附录2 人凝血因子Ⅱ效价测定法（一期法）
本法用人凝血因子II缺乏血浆作为基质血浆，采用一期法测定供试品中人凝血因子II效价。
1 试剂
1.1 稀释液
称取巴比妥钠11.75g、氯化钠14.67g溶于1570ml水中，用1mol/L盐酸调pH至7.3，再加水至2000ml。用前加人血白蛋白至终浓度为1%。
1.2 含钙促凝血酶原激酶（Thromboplastin）
1.3 人凝血因子II缺乏血浆
人凝血因子II含量低于1%的病人血浆或人工基质血浆。
2 人凝血因子Ⅱ标准溶液的配制
用人凝血因子Ⅱ缺乏血浆将人凝血因子Ⅱ标准品稀释成1IU/ml，再用稀释液分别进行10倍、20倍、40倍和80倍稀释，置冰浴备用。
3 供试品溶液的配制
用人凝血因子Ⅱ缺乏血浆将供试品稀释成约1IU/ml，再用稀释液进行10倍和20倍或40倍稀释，置冰浴待用。
4 测定法
取供试品溶液0.1ml，加人凝血因子Ⅱ缺乏血浆0.1ml，混匀，置37℃水浴保温一定时间（一般3分钟），然后加入已预热至37℃含钙促凝血酶原激酶溶液0.2ml，记录凝固时间。
用不同稀释度的人凝血因子Ⅱ标准溶液0.1ml替代供试品溶液，同法操作。
5 结果计算
将标准溶液人凝血因子Ⅱ活性（IU/ml）对其相应的凝固时间（秒）进行双对数直线回归处理，求出直线回归方程。将供试品溶液的凝固时间（秒）对数值代入方程，求得的值的反对数，即为供试品人凝血因子Ⅱ效价，再乘以稀释倍数，即为每1ml供试品溶液人凝血因子Ⅱ效价（IU/ml），取供试品各稀释度的人凝血因子Ⅱ效价均值即为供试品人凝血因子Ⅱ效价（IU/ml）。
【附注】
（1）直线回归相关系数应不低于0.98。
（2）测定时要求每个稀释度平行测定2管，两管之差不得超过均值10%，否则重测。
（3）直接与标准品、供试品和血浆接触的器皿应为塑料或硅化制品。
（4）标准品和供试品稀释后，应置冰浴待用。
（5）采用全自动凝血仪时，则按仪器使用说明书进行。
附录3 人凝血因子Ⅶ效价测定法（一期法）
本法用人凝血因子Ⅶ缺乏血浆作为基质血浆，采用一期法测定供试品人凝血因子Ⅶ效价。
1 试剂
1.1 稀释液
称取巴比妥钠11.75g、氯化钠14.67g溶于1570ml水中，用1mol/L盐酸调pH至7.3，再加水至2000ml。用前加人血白蛋白至终浓度为1%。
1.2 含钙促凝血酶原激酶（Thromboplastin）
1.3 人凝血因子Ⅶ缺乏血浆
人凝血因子Ⅶ含量低于1%的病人血浆或人工基质血浆。
人凝血因子Ⅶ标准溶液的配制
用人凝血因子Ⅶ缺乏血浆将人凝血因子Ⅶ标准品稀释成1IU/ml，再用稀释液分别进行10倍、20倍、40倍和80倍稀释，置冰浴备用。
2 供试品溶液的配制
用人凝血因子Ⅶ缺乏血浆将供试品稀释成约1IU/ml，再用稀释液进行10倍和20倍或40倍稀释，置冰浴待用。
3 测定法
取供试品溶液0.1ml，加人凝血因子Ⅶ缺乏血浆0.1ml，混匀，置37℃水浴保温一定时间（一般3分钟），然后加入已预热至37℃含钙促凝血酶原激酶溶液0.2ml，记录凝固时间。
用不同稀释度的人凝血因子Ⅶ标准溶液0.1ml替代供试品溶液，同法操作。
4 结果计算
将标准溶液人凝血因子Ⅶ效价（IU/ml）对其相应的凝固时间（秒）进行双对数直线回归处理，求出直线回归方程。将供试品溶液的凝固时间（秒）对数值代入方程，求得的值的反对数，再乘以稀释倍数，即为每1ml供试品溶液人凝血因子Ⅶ效价（IU/ml），取供试品各稀释度的人凝血因子Ⅶ效价均值即为供试品人凝血因子Ⅶ效价（IU/ml）。
【附注】
（1）直线回归相关系数应不低于0.98。
（2）测定时要求每个稀释度平行测定2管，两管之差不得超过均值10%，否则重测。
（3）直接与标准品、供试品和血浆接触的器皿应为塑料或硅化制品。
（4）标准品和供试品稀释后，应置冰浴待用。
（5）采用全自动凝血仪时，则按仪器使用说明书进行。
附录4 人凝血因子X效价测定法（一期法）
本法用人凝血因子Ⅹ缺乏血浆作为基质血浆，采用一期法测定供试品人凝血因子Ⅹ效价。
1 试剂
1.1 稀释液
称取巴比妥钠11.75g、氯化钠14.67g溶于1570ml水中，用1mol/L盐酸调pH至7.3，再加水至2000ml。用前加人血白蛋白至终浓度为1%。
1.2 含钙促凝血酶原激酶（Thromboplastin）
1.3 人凝血因子Ⅹ缺乏血浆
人凝血因子Ⅹ含量低于1%的病人血浆或人工基质血浆。
2 人凝血因子Ⅹ标准溶液的配制
用人凝血因子Ⅹ缺乏血浆将人凝血因子Ⅹ标准品稀释成1IU/ml，再用稀释液分别进行10倍、20倍、40倍和80倍稀释，置冰浴备用。
3 供试品溶液的配制
用人凝血因子Ⅹ缺乏血浆将供试品稀释成约1IU/ml，再用稀释液进行10倍和20倍或40倍稀释，置冰浴待用。
4 测定法
取供试品溶液0.1ml，加人凝血因子Ⅹ缺乏血浆0.1ml，混匀，置37℃水浴保温一定时间（一般3分钟），然后加入已预热至37℃含钙促凝血酶原激酶溶液0.2ml，记录凝固时间。
用不同稀释度的人凝血因子Ⅹ标准溶液0.1ml替代供试品溶液，同法操作。
5 结果计算
将标准溶液人凝血因子Ⅹ效价（IU/ml）对其相应的凝固时间（秒）进行双对数直线回归处理，求出直线回归方程。将供试品溶液的凝固时间（秒）对数值代入方程，求得的值的反对数，再乘以稀释倍数，即为每1ml供试品溶液人凝血因子Ⅹ效价（IU/ml），取供试品各稀释度的人凝血因子Ⅹ效价均值即为供试品人凝血因子Ⅹ效价（IU/ml）。
【附注】
（1）直线回归相关系数应不低于0.98。
（2）测定时要求每个稀释度平行测定2管，两管之差不得超过均值10%，否则重测。
（3）直接与标准品、供试品和血浆接触的器皿应为塑料或硅化制品。
（4）标准品和供试品稀释后，应置冰浴待用。
（5）采用全自动凝血仪时，则按仪器使用说明书进行。
附录5 人凝血酶活性测定法
本法依据凝血酶能使人纤维蛋白原凝固原理，将供试品和人纤维蛋白原混合，观察是否产生凝块，根据凝块判定制品是否含有凝血酶活性。
1 试剂
1.1 5g/L纤维蛋白原溶液
用生理氯化钠溶液将复溶的冻干人纤维蛋白原稀释成5g/L。
1.2 生理氯化钠溶液
1.3 硫酸鱼精蛋白
1.4 人凝血酶
用生理氯化钠溶液将复溶的冻干人凝血酶稀释成0.5IU/ml。
2 测定法
取供试品0.2ml，加5g/L纤维蛋白原溶液0.2ml，37℃放置24小时，观察有无凝块或纤维蛋白析出。放置期间至少观察2次。本试验同时做阴性及阳性对照。
阴性对照：用0.2ml生理氯化钠溶液替代供试品，其余操作同供试品。
阳性对照：用0.2ml0.5IU/ml凝血酶替代供试品，其余操作同供试品。
3 结果判定
阴性对照无任何凝块或纤维蛋白析出，阳性对照有凝块或纤维蛋白析出，则试验成立。肉眼观察供试品有无凝块或纤维蛋白析出。
【附注】
含肝素的供试品应根据肝素含量，用适量的硫酸鱼精蛋白中和供试品内的肝素，再取供试品检查（按10μg硫酸鱼精蛋白中和1IU肝素进行）。
附录6 肝素含量测定法（凝固法）
本法依据硫酸鱼精蛋白能中和抗凝剂肝素，从而影响血浆凝固时间的原理，测定供试品中肝素含量。
1 试剂
1.1 缺血小板人血浆
无菌采集人全血于3.8%枸橼酸钠抗凝剂中（9∶1），混匀，4℃、1500r/min离心30分钟，用塑料注射器取上层2/3的血浆，4℃、3500r/min离心30分钟，取上层2/3血浆，分装于塑料管中，每支3ml，保存-40℃备用。
1.2 pH7.5Tris缓冲液
称取Tris7.27g、氯化钠5.27g，加水溶解并稀释至1000ml（用HCl调pH至7.5）。
1.3 脑磷脂混悬液
冻干脑磷脂加水复溶，用生理氯化钠溶液稀释，稀释后的脑磷脂混悬液应使空白凝固时在200～300秒。
1.4 0.025mol/L氯化钙溶液
称取147g氯化钙（CaCl2.2H2O）溶于1000ml水中，配成1mol/L氯化钙贮存液，用时用水稀释40倍，配成0.025mol/L氯化钙溶液。
1.5 硫酸鱼精蛋白溶液
称取适量硫酸鱼精蛋白，用pH7.5Tris缓冲液溶解并稀释成1～20mg/ml浓度。
供试品溶液的配制
于每支含10μl不同浓度的硫酸鱼精蛋白溶液的塑料管中，各加按标示量复溶后的供试品0.5ml，混匀。
2 测定法
向已含有缺血小板人血浆0.1ml的塑料管中、加脑磷脂混悬液0.1ml，混匀，37℃、1分钟，加供试品溶液0.1ml、已预热至37℃的0.025mol/L氯化钙溶液0.1ml，记录凝固时间。用0.1mlTris缓冲液（pH7.5）代替混合物，同法操作作空白对照。
3 结果计算
空白对照凝固时间不低于200秒试验成立。取凝固时间最短的供试品管，作为硫酸鱼精蛋白中和0.5ml供试品中的肝素量。10μg硫酸鱼精蛋白中和1IU肝素。例如混合物中每1ml含30μg硫酸鱼精蛋白，中和0.5ml供试品中的肝素量则为3IU，即每1ml供试品含6IU肝素。
【附注】直接与血和血浆接触的器具应为塑料或硅化的玻璃制品。
附录7 活化的凝血因子活性测定法
本法依据活化的凝血因子活性在脑磷脂存在的情况下使缺血小板人血浆发生凝固的原理，将供试品和人缺血小板血浆及脑磷脂混合，测定凝固时间，根据凝固时间判定供试品是否含有活化的凝血因子。
1 试剂
1.1 缺血小板人血浆
无菌采集人全血于3.8%枸橼酸钠抗凝剂中（9∶1），混匀，4℃、1500r/min离心30分钟，用塑料注射器取上层2/3的血浆，4℃、3500r/min离心30分钟，取上层2/3血浆，分装于塑料管中，每支3ml，保存-40℃备用。
1.2 pH7.5Tris缓冲液
称取Tris7.27g、氯化钠5.27g，加水溶解并稀释至1000ml（用HCl调pH至7.5）。
1.3 脑磷脂混悬液
冻干脑磷脂加水复溶，用生理氯化钠溶液稀释，稀释后的脑磷脂混悬液应使空白凝固时在200～300秒。
1.4 0.025mol/L氯化钙溶液
称取147g氯化钙（CaCl2.2H2O）溶于1000ml水中，配制成1mol/L氯化钙贮存液，用时用水稀释40倍，配制成0.025mol/L氯化钙溶液。
1.5 硫酸鱼精蛋白溶液
称取适量硫酸鱼精蛋白，用pH7.5Tris缓冲液溶解并稀释成适宜浓度。
2 供试品溶液的配制
取复溶后的供试品，根据测定的肝素含量加入适量硫酸鱼精蛋白中和供试品中的肝素（10μg硫酸鱼精蛋白中和1IU肝素），再用Tris缓冲液（pH7.5）做稀释10和100倍。
3 测定法
取缺血小板人血浆0.1ml，加脑磷脂混悬液0.1ml，混匀，37℃、1分钟，加供试品溶液（10倍或100倍稀释液）0.1ml、已预热至37℃的0.025mol/L氯化钙溶液0.1ml，记录凝固时间。用0.1mlTris缓冲液（pH7.5）替换供试品溶液，同法操作作空白对照。
4 结果判定
空白对照凝固时间不低于200秒试验成立。1：10和1：100供试品稀释液凝固时间均应不低于150秒。
【附注】
（1）直接与血和血浆接触的器具应为塑料或硅化的玻璃制品。从供试品稀释到测定完毕应在30分钟内完成。
（2）供试品每个稀释度作2管。〖LM〗
附件2：
组织胺人免疫球蛋白制造及检定规程
RequirementsforHumanHistaglobulin
本品系由人免疫球蛋白、磷酸组织胺（或盐酸组织胺）配制而成的冻干制剂，能刺激机体产生抗组织胺的抗体，从而消除内源性组织胺的致病作用。本品不含抗生素。
1 基本要求
1.1.1 设施与生产质量管理
按中国《药品生产质量管理规范》要求实施。厂房设施必须专用，不得与其他异种蛋白制剂混用。
1.1.2 原料及辅料
生产中所用的稀释剂、稳定剂、防腐剂、灭活剂、佐剂，及其他化工原料，其质量应符合现行《中国药典》或《中国生物制品主要原辅材料质控标准》的要求。
辅料品种与用量应当无害，不影响制品的安全性和有效性，并应对规定的检定方法无干扰。化工及食品原料作为原料时，必须制定符合药用要求的标准，并需经国家药品监督管理部门批准。
1.1.3 生产用水
生产用水源水应符合饮用水标准，纯化水、注射用水及灭菌注射用水应符合现行《中国药典》标准。
1.1.4 生产用器具
直接用于生产的金属或玻璃等器具，必须专用，并经过严格清洗及去热原质处理或灭菌处理。
2 制造
2.1 主要原料
人免疫球蛋白应符合现行版规程中《人免疫球蛋白制造及检定规程》要求。
2.2 半成品制备
2.2.1 配制
按每1ml含磷酸组织胺（或盐酸组织胺）0.075～0.25μg，人免疫球蛋白6mg，硫代硫酸钠（Na2S2O3·5H2O）8～30mg配制而成，冻干制剂可加入葡萄糖5mg。
2.2.2 配制好的原液应立即进行除菌过滤。除菌过滤前应调pH为6.6～7.4。澄清及除菌过滤，应使用无石棉的介质。
2.2.3 半成品检定
按3.1项进行。
2.3 成品制备
2.3.1 分批
应符合本版规程通则《生物制品分批规程》的有关规定。
2.3.2 分装及冻干
按本版规程通则《生物制品分装规程》进行.除菌过滤分装的制品应及时冻结。冻干过程制品温度不得超过35℃，真空封口。
2.3.3 规格
每支（瓶）人免疫球蛋白装量应不低于12mg。
2.3.4 包装
应符合本版规程通则《生物制品包装规程》的有关规定。
3 检定
3.1 半成品检定
3.1.1 蛋白质含量
应不低于6g/L。
3.1.3 pH值
按3.3.3.2项进行。
3.1.4 无菌检查
按本版规程通则《生物制品无菌试验规程》A项进行，应符合规定。
3.1.5 热原质检查
按本版规程通则《生物制品热原质试验规程》进行。注射剂量按家兔体重每1kg注射3ml，应符合规定。
3.3 成品检定
每批成品应抽样作全面检定。不同机柜冻干制品应分别抽样作无菌检查及水分测定。冻干制剂，以下检定项目除真空度、溶解时间、水分外，其余项目按制品标示量加入灭菌注射用水溶解后进行检定。
3.3.1 鉴别试验
按《中国生物制品规程》2002年增补本《血液制品鉴别试验》B法进行，主要沉淀线应为人免疫球蛋白。
3.3.2 物理检查
3.3.2.1 外观
应为白色或淡黄色疏松体，无融化迹象。冻干制剂复溶后应为无色或淡黄色溶液，可带乳光，不应有异物、混浊或摇不散的沉淀。
3.3.2.2 溶解时间
冻干制剂加灭菌注射用水2ml，应在10分钟内溶解。
3.3.3 化学检定
按本版规程附录《生物制品化学及其他检定方法》进行。
3.3.3.1 水分
取供试品0.2～1.0g置于已干燥至恒重的称量瓶中，加盖，精密称定重量（称量瓶中供试品厚度应在5mm以下），放入五氧化二磷干燥器中，打开瓶盖，于60℃将干燥器抽真空至133Pa以下，干燥至恒重。干燥完毕应缓慢通入经浓硫酸脱水的干燥空气。按下式计算供试品水分含量，应不高于5.0%。
供试品水分含量%（W/W）=干燥失重÷供试品重量×100
3.3.3.2 pH值
应为6.0～8.0。
3.3.3.3 蛋白质总量
按3.3.2.2项加入的溶剂量，再乘以供试品蛋白质量含量（g/ml），计算每瓶蛋白质总量，应不低于12mg。
3.3.3.4 游离磷酸组胺含量
按附录1方法测定，应不大于0.2μg/ml。
3.3.3.5 磷酸组胺与人免疫球蛋白结合率
按下式计算磷酸组胺与人免疫球蛋白结合率，应不低于30%。
W（μg/ml）-F（μg/ml）
磷酸组胺与人免疫球蛋白结合率（%）= ─────────────×100
W（μg/ml）
式中：W为加入的磷酸组胺量；F为游离磷酸组胺含量
3.3.3.6 糖含量
若制品中加糖（葡萄糖、麦芽糖等），其含量应不高于50g/L。
3.3.3.7 硫柳汞含量
若制品中加硫柳汞，其含量应不高于0.1g/L。
3.3.4 无菌检查
按本版规程通则《生物制品无菌试验规程》A项进行，符合规定。
3.3.5 异常毒性检查
按本版规程通则《生物制品异常毒性试验规程》进行，符合规定。
3.3.6 热原质检查
按本版规程通则《生物制品热原质试验规程》进行。注射剂量按家兔体重每1kg注射3ml，应符合规定。
4 保存、运输及有效期
在2～8℃避光保存和运输。有效期自分装之日起，按国家药品监督管理部门批准的执行。
5 使用说明
根据国家药品监督管理部门批准的内容及本版规程通则《生物制品包装规程》编写。
6 附录
组织胺人免疫球蛋白磷酸组胺测定方法
附录 组织胺人免疫球蛋白磷酸组胺测定方法
该法通过磷酸组织胺与邻苯二甲醛在碱性条件下生成荧光衍生物，测定组织胺人免疫球蛋白制品中游离磷酸组胺含量。
1 试剂
1.1 100ng/ml磷酸组织胺标准工作液
精密称取磷酸组织胺标准品2.76mg，加0.1mol/L盐酸溶解并稀释至10.0ml，摇匀，配置成100μg/ml贮备液，-20℃贮存备用。试验当天取贮备液0.1ml，用0.1mol/L盐酸定溶至100ml，即为100ng/ml磷酸组织胺标准工作液。
1.2 25%三氯乙酸溶液
称取三氯乙酸25g，加水溶解并稀释至100ml。
1.3 0.1%邻苯二甲醛－甲醇溶液
称取邻苯二甲醛0.1g，加甲醇溶解并稀释至100ml。
1.4 0.5mol/L盐酸溶液
取浓盐酸4.17ml，加甲醛至100ml。
1.5 0.1mol/L盐酸溶液
取0.5mol/L盐酸20ml，加水至100ml。
1.6 2.5mol/L氢氧化钠溶液
称取氢氧化钠10g，加水100ml溶解。
1.7 0.4mol/L氢氧化钠溶液
取2.5mol/L氢氧化钠16ml，加水至100ml。
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毕节地区行政公署关于印发《毕节地区国有土地有偿使用暂行办法》的通知
贵州省毕节地区行政公署
毕署通〔2007〕15号
毕节地区行政公署关于印发《毕节地区国有土地有偿使用暂行办法》的通知
各县（自治县）、市人民政府，行署有关部门、企事业单位：
《毕节地区国有土地有偿使用暂行办法》已经行署同意，现印发给你们，请遵照执行。
二OO七年三月十五日
毕节地区国有土地有偿使用暂行办法
第一章 总 则
第一条 为合理利用土地资源，加强国有土地有偿使用管理，规范国有土地有偿使用行为，培育和规范土地市场，保护有关当事人的合法权益，促进经济发展和城市建设，根据《中华人民共和国土地管理法》、《中华人民共和国城市房地产管理法》等有关法律、法规，结合本地区实际，制定本办法。
第二条 毕节地区行政区域内国有土地有偿使用的管理适用本办法。
本办法所称国有土地有偿使用，包括国有土地使用权出让、转让、出租、抵押。
第三条 地直各部门使用的国有土地的收购、储备、出让、转让由地区行政公署集中统一管理，各县（市）的国有土地由当地人民政府集中统一管理，当地国土资源行政管理部门具体负责本行政辖区内国有土地收购、储备、出让、转让的管理。
第四条 除法律规定可以采取行政划拔方式取得用地外，其他国有土地必须依法以有偿方式取得。
第五条 国有土地有偿使用权出让和国有土地租赁均应在土地有形市场内进行。
第六条 土地市场管理的核心内容为经营性土地供应计划管理、经营性土地公开交易管理和土地使用权价格管理。
依法建立健全建设用地供应总量控制、城市建设用地集中供应、土地使用权公开交易、基准地价定期更新和公布、土地登记公开查询和集体决策等规范土地市场运行的制度。
第七条 土地交易遵循公平、公正、公开原则，商业、旅游、娱乐和商品住宅等经营性用地，必须以招标、拍卖、挂牌方式出让。
前款规定以外用途的土地供应计划公布后，同一宗地有两个以上意向用地者的，也应当采用招标、拍卖、挂牌方式出让。
第八条 土地交易应当遵守有关法律、法规、规章以及本办法的规定。违反规定的土地交易无效。
第九条 国土资源行政主管部门工作人员在土地有偿使用工作中，收受贿赂、泄露秘密、玩忽职守、徇私舞弊的，追究有关人员的责任，给予纪律处分；涉嫌犯罪的，移送司法机关处理。
第二章 机构和职能
第十条 行署及各县（市）人民政府应设立土地资产管理委员会，委员会对国有土地资产管理的重大问题进行决策和协调，主要职责为：
（一）审议土地资产管理的重大政策、措施；
（二）审议土地储备年度计划；
（三）审议经营性土地年度供应计划；
（四）审议基准地价、标定地价的调整方案；
（五）审议重大出让项目的土地出让方案；
（六）审议以地融资等土地资本化运作方案；
（七）审议土地资产管理年度工作报告和政府土地收益及资产负债情况；
（八）审议其他有关事项。
第十一条 行署及各县（市）土地资产管理委员会主任应由政府一把手担任，副主任由分管副县（市）长担任，政府有关行政主管部门的负责人为委员会成员。
委员会下设办公室，作为各县（市）土地资产管理委员会的常设办事机构，负责组织贯彻土地资产管理委员会的各项决议，行使执行、协调、组织、监督的职能。办公室主任由当地国土资源行政主管部门负责人兼任。地、县（市）国土资源部门设立的土地储备交易中心，承担具体事务。
第十二条 土地储备交易中心的主要职责：
（一）负责执行土地储备交易年度计划；根据各县（市）人民政府批准的土地储备交易年度计划，统一实施集体土地的征收、国有土地的收购，开展土地储备交易；对储备的土地实施土地整理工作；根据各县（市）人民政府批准的经营性土地年度供应计划，提供可出让土地，编制土地的出让底价。
（二）进行国有土地使用权的持股、参股、控股、投资和经营活动，负责管理土地出让金等政府土地收益及债项财政资金，建立稳定的偿债机制；提供土地资产的融资、抵押资产的调剂、租赁等业务。
第十三条 土地储备交易中心是唯一的土地有形市场和土地交易的专门机构，负责组织实施行政区域内的土地使用权出让、租赁工作，收集、分析和统一发布各类土地收购、储备、交易信息，提供规范的土地洽谈、招商、交易场所。
第三章 土地收购储备整理
第十四条 实行土地收购储备制度。本办法所称土地收购储备，是指土地收购储备机构将列入土地收购储备计划的土地实施收购、收回、征用，实施前期开发整理并予以储存的行为。
第十五条 土地收购补偿标准按照以下原则确定：
国有土地按照现状土地使用性质评估确定收购补偿标准，城市居民房屋的拆迁按照《毕节地区房屋拆迁管理办法》规定确定补偿标准。
第十六条 土地使用者对所使用的行政划拨土地不得自行交易或改变土地用途，确需转移土地使用权或改变土地用途的，应报有批准权的人民政府批准后，由当地土地储备交易中心统一按现状用途收购储备，依据城市规划进行整理后，经土地有形市场实施出让。
第四章 土地供应计划
第十七条 我区实行土地供应计划管理制度。各县（市）国土资源行政主管部门会同当地规划、建设等行政主管部门，制订土地年度供应计划，经土地资产管理委员会批准后，应于每年1月份向社会公布，由地、县（市）国土资源行政主管部门统一组织实施。
第十八条 土地年度供应计划管理应当遵循下列原则：
（一）符合各县（市）土地利用总体规划、城市总体规划、经济社会发展计划、产业政策和近期建设规划；
（二）盘活存量和控制增量相结合，控制建设用地总量，集约利用土地，保护耕地；
（三）按照市场经济规律强化政府对土地市场的宏观调控职能，以需求指导供应，以供应引导需求。
第十九条 经营性土地凡未纳入年度供应计划的，原则上不予供地；确需实施建设的，报当地土地资产管理委员会批准，可以补充调整纳入经营性土地年度供应计划。
第二十条 严格控制经济实用住房建设用地的划拨，对已划拨但未在规定时间动工建设的土地，由当地土地资产管理委员会按规定将其收回，进行招标、拍卖、挂牌方式出让。
第五章 地价和出让金
第二十一条 全区行政辖区内的区域基准地价、标定地价和地价修正体系由各级国土资源行政主管部门会同本级物价行政主管部门制定，经各县（市）土地资产管理委员会审议报市当地政府批准后公布。基准地价、标定地价应定期修正调整，修正调整周期一般为两年。
基准地价和标定地价按商业金融业用地、工业仓储用地、居住用地、交通用地等土地用途确定。
第二十二条 严格实行土地使用权出让价格评估备案制度。
实施土地使用权出让前，应当委托有资质的土地价格评估机构进行地价评估，地价评估结果报相应国土资源行政主管部门备案。
第二十三条 土地使用权出让价格由三部分组成，即土地补偿费、土地开发费和政府净收益。土地使用权出让价格的收取标准一般不低于评估确认地价。其中，土地出让金政府净收益额不低于土地出让金总额的30%--45%，并按不同土地用途征收。
任何部门和个人不得擅自减免土地出让金。
第二十四条 现土地使用者需对正在使用的原划拨土地申请出让手续，且不转移土地使用权，不改变土地用途的，土地出让金政府净收益额按不低于评估确认地价的30%--45%比例收取。
第二十五条 各县（市）国土资源行政主管部门应当根据评估备案地价和市场需求状况，综合确定标底或者底价。招标标底和拍卖、挂牌的底价，在招标拍卖挂牌出让活动结束之前必须保密。
第二十六条 以竞买方式取得的土地使用权，买受人不得擅自对竞买文件中约定的土地使用条件进行修改。
第二十七条 确需改变土地使用权出让合同约定的土地用途或增加建筑面积的，经批准，应当将有关变动情况公示20天。在公示期内如无竞买申请的，应重新签订土地使用权出让合同或签订补充合同，相应调整土地使用权出让金；如有竞买申请的，应重新进行公开出让。
第六章 国有土地租赁
第二十八条 国有土地租赁是国有土地有偿使用的一种形式，是对出让方式的补充。
第二十九条 国有土地租赁的最长期限不得超过5年，租金按照基准地价进行折算，租金标准随基准地价的调整而调整。
第七章 土地使用权转让、出租和抵押
第三十条 下列土地使用权，不得转让：
（一）以出让方式取得的土地使用权，未按合同约定支付全部土地使用权出让金的，未取得土地使用证或未按土地使用权出让合同规定的期限和条件投资开发、利用土地的；
（二）以划拨方式取得的土地使用权；
（三）依法宣布收回土地使用权的；
（四）未依法登记取得土地使用证或虽依法登记但土地权属、用途等已发生变更、未依法进行相应的变更登记的；
（五）法律、法规、规章或各县（市）人民政府规定禁止转让的其他情形。
第三十一条 通过有偿使用方式取得土地使用权的使用者可以按合同约定，将土地使用权随同地上建筑物、其他附着物出租给承租人使用。
第三十二条 行政划拨土地经国土资源行政主管部门批准，补办土地使用权出让手续，补交土地使用权出让金后方可转让、出租。
第三十三条 以依法取得的国有土地上的房屋抵押的，该房屋占用范围内的国有土地使用权同时抵押。以出让方式取得的国有土地使用权抵押的，应当在抵押时将该国有土地上的房屋同时抵押。
无地上物的划拨土地使用权，不允许设定抵押权。
第三十四条 处分设定抵押权的划拨土地使用权，须在有形市场内公开拍卖，将拍卖所得的价款优先缴纳土地使用权出让金，剩余款项依法处理。
第八章 闲置土地和土地使用权终止
第三十五条 禁止任何单位和个人以计划、规划、建设等有关批准文件圈占土地。对取得上述批准文件的建设项目，必须在规定期限办理有关用地、手续并进行开发建设；否则，原批准文件依法废止。
第三十六条 闲置土地是指土地使用者依法取得土地使用权后，未经原批准用地的人民政府同意，超过规定的期限未动工开发建设的建设用地。
第三十七条 具有下列情形之一的，也可以认定为闲置土地：
（一）国有土地有偿使用合同或者建设用地批准书未规定动工开发建设日期，但自国有土地有偿使用合同生效或者土地行政主管部门建设用地批准书颁发之日起满1年未动工开发建设的；
（二）已动工开发建设，但开发建设的面积占应动工开发建设总面积不足三分之一或者已投资额（不含土地出让金）占投资总额不足25%且未经批准中止开发建设连续满1年的；
（三）城市规划区的建设用地，虽已完成房屋拆迁、基础工程，但未经批准中止开发建设满2年的；
（四）法律、法规规定的其他情形。
第三十八条 土地行政主管部门对其认定的闲置土地，按照《闲置土地处置办法》进行处置。
第三十九条 有下列情形之一的，土地使用权终止：
（一）土地使用权出让合同规定的期限届满；
（二）土地使用者死亡而无合法继承人；
（三）超过出让合同约定动工开发日期满2年未动工，收回土地使用权；
（四）各县（市）人民政府根据社会公共利益的需要提前收回土地使用权；
（五）法律、法规规定的其他情形。
第四十条 出现前条第（一）、（二）、（三）项规定的情形，土地使用权连同该宗土地上的建筑物、附着物由各县（市）人民政府无偿收回，法律、法规另有规定的除外。
第四十一条 土地使用权年期届满，土地使用者需继续使用该宗土地的，应提前六个月向土地行政主管部门提出申请。土地行政主管部门应自接到申请之日起一个月内，按下列原则做出是否准予继续使用的答复：
（一）土地使用者申请的土地用途不符合当时城市规划要求的，土地使用者的申请不予批准；
（二）土地使用者申请的土地用途符合当时城市规划要求的，可以准予继续使用。
准予土地使用者继续使用土地的，土地使用者应自接到土地行政主管部门批准文件之日起15日内与土地行政主管部门重新签订出让合同，支付土地使用权出让金，并办理登记手续。
第九章 附 则
第四十二条 本办法施行后，行署和各县（市）人民政府有关部门发布的有关规定与本办法不一致的，以本办法为准。
第四十三条 本办法自印发之日起施行。